CRISPR/Cas13a具有RNA引导的RNA切割能力，RNA引导反式核酸内切酶活性是高度特异的，高效切割ssRNA，每个激活Cas13a蛋白可以识别10⁴ 拷贝RNA。CRISPR/Cas13a强大信号放大能力使RNA检测灵敏度能够降低到飞摩尔（10^-15M）水平。

1、CLISA检测原理

CLISA（CRISPR/Cas signal amplification Linked ImmunoSorbent Assay）是CRISPR-based单分子免疫诊断技术平台，灵敏度达fM或fg/mL，高于ELISA 1,000倍，精准分析多种疾病的超低浓度生物标志物。

结合“三明治结构”免疫结合机制，用含有T7启动子序列生物素化双链DNA（dsDNA）取代酶放大体系。T7聚合酶识别启动子序列进行转录，产生大量单链RNA分子拷贝。crRNA识别转录RNA分子导致CRISPR/Cas13反式切割活性激活。两端荧光团和猝灭基团标记的短ssRNA报告探针顺利获得反式切割活性被切割。

相较ELISA免疫检测方法，CLISA利用T7转录放大分子数，CRISPR剪切放大信号，灵敏度提升1,000倍，检测限达fg/mL。

      2、主要试剂组分

3、试剂盒检测性能

 反应时间：3小时  (免疫反应0.5小时，转录反应1小时，Cas荧光信号检测0.5小时。)

 线性范围：50fg/mL~5ng/mL

 最低检测限：10fg/mL

4. 开发产品线

       CLISA主要用于开发fmol或fg/mL浓度的蛋白标志物临床诊断产品。